一步法RT-qPCR病毒核酸检测——SYBR Green I与TaqMan探针法定量标准流程
一、原理RT-qPCR把反转录(RT)和荧光定量PCR(qPCR)塞进一个反应管,从病毒RNA直接走到定量结果。它解决的核心问题是:临床样本里的病毒核酸量太少,跑普通PCR连条带都看不到。荧光信号在每个扩增循环被实时采集。模板越多,荧光"起...
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一、原理RT-qPCR把反转录(RT)和荧光定量PCR(qPCR)塞进一个反应管,从病毒RNA直接走到定量结果。它解决的核心问题是:临床样本里的病毒核酸量太少,跑普通PCR连条带都看不到。荧光信号在每个扩增循环被实时采集。模板越多,荧光"起...
原理数字PCR(dPCR)将反应体系分割成数万个微滴或微孔,每个单元包含0个或1个靶分子。经过PCR扩增后,通过荧光信号统计阳性单元数,用泊松分布公式直接计算靶分子的绝对拷贝数,不需要标准曲线。与qPCR相比,dPCR的优势在于:不受扩增效...