原理
KingFisher自动化提取平台采用磁棒法而非磁板法——磁棒套内置磁芯插入反应孔吸附磁珠，转移至下一孔位后退磁释放磁珠。这一设计避免了磁板法中孔底磁珠难以重悬的问题，且全程无液体管路，消除样本间交叉污染风险。配合商业化预装裂解-结合-洗涤-洗脱试剂的深孔板，上机后35分钟内自动完成96个样本的核酸提取。
步骤
1. 样本加载
200 μL样本加入预装裂解结合液的96孔深孔板A列，56℃孵育10 min（由加热模块自动控制）。同时将预装洗涤液和洗脱液的B-E列深孔板和磁棒套放入对应位置。
2. 结合与转移
程序启动后机械臂将磁棒套插入A列，磁棒套磁化后吸附磁珠。磁棒套携带磁珠转移至B列（洗涤液I），退磁后磁珠释放，磁棒套在液体中上下振荡重悬磁珠30秒。
3. 洗涤与洗脱
磁棒套依次经B→C→D列完成3次洗涤（洗涤液I/II/80%乙醇），最后转移至E列洗脱板。洗脱液50-100 μL，磁棒套振荡后静置2 min，磁化吸附磁珠后回退，留洗脱液在孔中。
4. 核酸回收
用8通道移液器将E列洗脱液转移至PCR板或冻存管。-20℃保存短期，-80℃长期保存。
关键试剂与条件
| 试剂/耗材 | 规格 | 用量 | 作用 |
|---|---|---|---|
| MagMAX提取试剂板 | 预装A-E列96孔深孔板 | 1板/96样本 | 裂解-结合-洗涤-洗脱全套试剂 |
| KingFisher磁棒套 | 96通道，PP材质 | 1个/次 | 磁珠转移载体 |
| 洗脱液 | TE或无核酸酶水 | 50-100 μL/孔 | 释放纯化核酸 |
FAQ
Q：KingFisher和手工磁珠提取有什么区别？
A：KingFisher用磁棒套物理转移磁珠而非手工加液-吸液，24个孔位转移只需约5秒，而手工操作每管磁力吸附需2分钟。自动化可显著降低人工误差，CT值CV通常<2>
Q：磁棒套可以重复使用吗？
A：不可以。磁棒套是耗材，重复使用会残留核酸导致交叉污染（carryover率可达0.01-0.1%）。对于低拷贝病毒样本，0.01%的carryover就足以造成假阳性。
Q：24通量和96通量怎么选？
A：24通量适合小型实验室日常<50>50样本/天的检测中心。两种通量的提取质量无差异，仅处理时间差约5分钟。
参考文献
- Kesanakurti P, Belton C, Saeed H, et al. Comparative evaluation of automated KingFisher Flex MagMax purification for SARS-CoV-2. Sci Rep. 2021;11:19926. DOI: 10.1038/s41598-021-99181-8
- Cortes-Hinojosa G, Ranade S, Koh D, et al. Automated High-Throughput RNA Extraction for Respiratory Virus Detection. J Mol Diagn. 2023;25(2):102-110. DOI: 10.1016/j.jmoldx.2022.10.005