原理
硅胶膜离心柱提法是Boom等人1990年建立的经典核酸纯化方法。病毒样本经含胍盐的裂解液处理后，核酸在高盐条件下与硅胶膜上的SiO₂基团形成氢键吸附。经两次含乙醇洗涤去除蛋白和盐分后，用低离子强度洗脱液（水或TE）破坏氢键，释放纯化核酸。该方法可从140 μL样本中回收80%以上的病毒RNA。
步骤
1. 裂解
140 μL样本（血清或VTM上清）加入560 μL裂解液AVL（含carrier RNA），涡旋15秒，室温孵育10 min。Carrier RNA作为共沉淀载体，显著提高微量核酸的回收率。
2. 结合
加入560 μL无水乙醇，涡旋15秒。将混合液分两次过柱（630 μL/次），8000 rpm离心1 min，弃滤液。乙醇调节结合条件使核酸更牢固地结合硅胶膜。
3. 洗涤
分别用AW1和AW2洗涤液各500 μL洗柱1次，8000 rpm离心1 min。AW2洗涤后空柱14000 rpm离心3 min，彻底干燥硅胶膜——残余乙醇严重抑制后续RT-PCR。
4. 洗脱
将柱子转移至新收集管，加60 μL洗脱液AVE（或DEPC水）至膜中央，室温静置1 min后8000 rpm离心1 min。洗脱液预热至60℃可提高得率约10%。
关键试剂与条件
| 试剂/耗材 | 规格 | 用量 | 作用 |
|---|---|---|---|
| 裂解液AVL | 含胍盐+carrier RNA | 560 μL/样本 | 裂解+结合条件 |
| QIAamp离心柱 | 硅胶膜，700 μL容积 | 1支/样本 | 核酸结合载体 |
| 洗涤液AW2 | 含乙醇 | 500 μL | 去盐洗脱 |
FAQ
Q：为什么要加carrier RNA？
A：病毒核酸量极低（ng级别），carrier RNA作为惰性填充物占据硅胶膜非特异性结合位点，并将微量核酸"托举"在膜表面。不加carrier RNA会导致回收率下降50-80%。
Q：柱提法和Trizol法怎么选？
A：柱提法适合血清/咽拭子等液体样本，提取的RNA完整性略低于Trizol但纯度更高（260/280≈1.8-2.0）。Trizol适合组织和细胞（含大量蛋白），但操作更繁琐且涉及有机溶剂。病毒溯源常规检测优先柱提法。
Q：离心速度必须严格8000 rpm吗？
A：8000 rpm是推荐值，6000-10000 rpm均可。速度过快（>12000 rpm）可能使硅胶膜变形导致渗漏，速度过慢（<5000>
参考文献
- Boom R, Sol CJ, Salimans MM, et al. Rapid and simple method for purification of nucleic acids. J Clin Microbiol. 1990;28(3):495-503. DOI: 10.1128/jcm.28.3.495-503.1990
- Yang G, Erdman DD, Kodani M, et al. Comparison of commercial systems for extraction of viral RNA. J Virol Methods. 2011;171(1):206-210. DOI: 10.1016/j.jviromet.2010.10.027