原理
磁珠法核酸提取的核心是硅羟基修饰的磁性纳米颗粒在离液盐（胍盐）条件下特异性结合核酸。病毒样本经裂解液（含高浓度胍盐+蛋白酶K）处理后，释放的核酸在高盐条件下与磁珠表面硅羟基形成氢键吸附。外加磁场固定磁珠，弃上清后经洗涤去除蛋白和盐，最后用低盐洗脱液断裂氢键释放纯化核酸。相比柱提法，磁珠法无离心过柱步骤，全程液体操作，天然适配自动化。
步骤
1. 样本裂解
200 μL样本（咽拭子VTM液或血清）加入300 μL裂解结合液（含胍盐+蛋白酶K），56℃孵育10 min。胍盐同时灭活病毒并变性蛋白释放核酸。
2. 磁珠结合
加入20 μL磁性微粒悬浮液和200 μL异丙醇，涡旋混匀，室温孵育5 min。异丙醇降低水的介电常数，促进核酸-磁珠结合。
3. 洗涤
将管置于磁力架上2 min吸附磁珠，弃上清。依次用洗涤液I（去蛋白）和洗涤液II（去盐）各洗1次，每次加入500 μL，磁力吸附后弃液。最后一次用80%乙醇洗涤。
4. 洗脱
打开管盖晾干2 min去除残余乙醇（乙醇残留抑制下游PCR）。加入50-100 μL洗脱缓冲液（TE或无核酸酶水），室温孵育2 min，磁力架吸附后转移上清即为纯化核酸。
关键试剂与条件
| 试剂/耗材 | 规格 | 用量 | 作用 |
|---|---|---|---|
| 裂解结合液 | 含胍盐+蛋白酶K | 300 μL/样本 | 灭活病毒、裂解、提供结合条件 |
| 磁性微粒 | 硅羟基修饰，~1 μm | 20 μL/样本 | 核酸结合载体 |
| 洗涤液I/II | 含乙醇去蛋白/去盐 | 各500 μL | 去除蛋白和盐 |
FAQ
Q：磁珠法和柱提法怎么选？
A：磁珠法适配自动化、通量高、无堵塞风险，适合>24样本。柱提法手动操作简单、人工成本低，适合<24>
Q：乙醇残留有什么影响？
A：乙醇抑制Taq DNA聚合酶活性，残留>1%即可使Ct值推迟1-2个循环。洗脱前务必彻底晾干（2-5 min），直到磁珠表面从光泽变为哑光。
Q：可以用无核酸酶水代替TE洗脱吗？
A：短期（<1>
参考文献
- Dundas N, Leos NK, Mitui M, et al. Comparison of Automated Nucleic Acid Extraction Methods. J Clin Virol. 2008;43(3):316-320. DOI: 10.1016/j.jcv.2008.08.009
- Verheyen J, Kaiser R, Bozic M, et al. Extraction of Viral Nucleic Acids with the MagNA Pure 96. J Clin Virol. 2012;54(4):348-352. DOI: 10.1016/j.jcv.2012.04.018