原理
静脉血采集与血清分离是病毒血清学溯源调查中的标准前处理步骤。血清不同于血浆——前者是血液凝固后析出的上清，不含纤维蛋白原和抗凝剂，避免了抗凝剂对ELISA和中和实验的干扰。促凝管（SST）内含硅颗粒和凝胶，加速凝血过程并形成凝胶屏障隔离血细胞，简化分离流程。
步骤
1. 静脉穿刺
选择肘正中静脉，止血带绑扎上臂中段不超过1分钟。22G蝶翼针或直针穿刺，连接真空采血管。采血量5 mL，见血液流入后松开止血带。
2. 混合与凝固
采血后立即轻柔颠倒采血管5-8次，使促凝剂均匀混合。竖直放置于室温（20-25℃）30 min，让血液充分凝固。未充分凝固即离心会导致溶血，释放的血红蛋白干扰ELISA读数。
3. 离心分离
配平后2500 g离心10 min（室温）。离心后可见三层：上层为淡黄色透明血清，中部为凝胶屏障，下层为暗红色血细胞凝块。Serum分离体积约2-2.5 mL。
4. 分装保存
用移液管小心吸取血清层，分装至1.5 mL冻存管（每管200-500 μL）。-20℃短期保存（≤3个月），-80℃长期保存。避免反复冻融——每次冻融循环抗体效价下降约10%。
关键试剂与条件
| 试剂/耗材 | 规格 | 用量 | 作用 |
|---|---|---|---|
| 血清分离促凝管 | BD Vacutainer SST 367986, 5 mL | 1管/样本 | 采集静脉血+促凝+凝胶分离 |
| 22G蝶翼采血针 | BD Vacutainer Safety-Lok | 1支/次 | 静脉穿刺 |
| 冻存管 | 1.5 mL, 无菌, 可立式 | 3-5管/样本 | 血清分装冻存 |
FAQ
Q：血清和血浆怎么选？
A：血清不含抗凝剂，适用于ELISA和中和实验（避免抗凝剂干扰抗原-抗体结合）。血浆含抗凝剂，适用于病毒核酸检测（抗凝剂保护核酸不被降解）。血清学溯源首选血清。
Q：溶血了还能用吗？
A：溶血血清在ELISA中背景吸光度显著升高，可能导致假阳性。轻微溶血（血红蛋白<50>200 mg/dL）应废弃。
Q：可以不空腹采血吗？
A：血清学检测不受饮食影响，无需空腹。但高脂血症样本（乳糜血清）会干扰ELISA OD值，需离心去除脂质层后使用。
参考文献
- Bowen RA, Remaley AT. Interferences from blood collection tube components on clinical chemistry assays. Biochem Med (Zagreb). 2014;24(1):31-44. DOI: 10.11613/BM.2014.006
- Tuck MK, Chan DW, Chia D, et al. Standard Operating Procedures for Serum and Plasma Collection. J Proteome Res. 2009;8(1):113-117. DOI: 10.1021/pr800545q